傷口愈合/細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)新方法

          細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。這種方法的原理是，當(dāng)細(xì)胞長到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。 基本的步驟包括“劃痕”的制造，細(xì)胞遷移期間圖像的獲得以及后期數(shù)據(jù)的處理。 

特點(diǎn)： 
 

1.  在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過程。

2.  非常適合研究細(xì)胞與胞外基質(zhì)（ECM），細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用引起的細(xì)胞 遷移。

3.  與包括活細(xì)胞成像在內(nèi)的顯微鏡系統(tǒng)兼容，可用于分析細(xì)胞間的相互作用。

4.  研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中簡單的方法。

傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)步驟： 
 

1.  培養(yǎng)板接種細(xì)胞之前先用marker筆在12孔板背面畫橫線標(biāo)記（方便拍照時(shí)定位同一 個(gè)視野）。

2.  細(xì)胞消化后接入12孔板，數(shù)量以貼壁后鋪滿板底為宜（數(shù)量少時(shí)可培養(yǎng)一段時(shí)間至鋪滿板底）。

3.  細(xì)胞鋪滿板底后，用1 ml槍頭垂直于孔板制造細(xì)胞劃痕，盡量保證各個(gè)劃痕寬度一致。（人工槍頭制造劃痕難以保證劃痕寬度的一致性，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這也是該方法大的缺陷。）

4.  吸去細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS沖洗孔板三次，洗去劃痕產(chǎn)生的細(xì)胞碎片。

5.  加入無血清培養(yǎng)基，拍照記錄。

6.  將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，每隔4-6小時(shí)取出拍照。

7.  根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

Culture Insert方法 
  

1.  準(zhǔn)備細(xì)胞，培養(yǎng)液，culture Insert。

2.  如圖，將細(xì)胞接種于Dish中間的Insert，細(xì)胞長滿Insert 區(qū)域后用鑷子移除Insert即可產(chǎn)生500 μm寬度的劃痕。

3.  每隔4-6小時(shí)拍照記錄。

4.  根據(jù)收集圖片數(shù)據(jù)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 
  

實(shí)驗(yàn)原理示意圖

總結(jié)：相比較于傳統(tǒng)的劃痕實(shí)驗(yàn)，Ibidi的設(shè)計(jì)更科學(xué)、重現(xiàn)性更好： 
  
 

除了保證劃痕均一性的難題，相信各位同學(xué)覺得難的還有后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果的處理，這里給大家分享一個(gè)操作非常簡單的在線軟件，只需注冊就可以免費(fèi)使用，只要上傳圖片很快就能把實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)到注冊郵箱，非常方便。

Wound Healing Image Analysis - WimScratch
  
 

Analysis Data Contains: 
 

Cell covered area

Speed of closure (available ≥ 5 images)

Acceleration characteristics (available ≥ 5 images)

Overview chart

Center piece approximation (available ≥ 10 images)